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新聞動態(tài) / news
淋巴母細胞株是如何構建成功的？
原載自：www.diomay.cn[行情動態(tài)] 2020-05-13 瀏覽次數：1093
細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株（finitecell strain）；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細胞株（continuous cell strain）。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
有關人類淋巴母細胞株的構建：
1.4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640；
2.混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min；
3.1500rpm，15min，吸取白細胞層于另一離心管中；
4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次；
5.將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻；
6.水浴搖床，40次/分，37℃，3hr；
7.1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)；
8.待5天后觀察細胞轉化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度；
9.待轉化細胞數量明顯上升，并出現細胞團塊后，可轉入25ml細胞培養(yǎng)瓶中，加1—2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10—15天，一般每隔3—4天觀察一次，決定是否換液、傳代；
10.細胞生長達一定數量后凍存，凍存前應進行核型分析和存檔。
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