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細(xì)胞株的核型分析實(shí)驗(yàn)操作流程分析

原載自:diomay.cn[技術(shù)資料頻道]  2021-10-12  瀏覽次數(shù):1600

   細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。然而細(xì)胞株在體外培養(yǎng)的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題,如細(xì)胞株無(wú)法在培養(yǎng)皿上貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞株生長(zhǎng)緩慢,細(xì)胞株死亡等。
  細(xì)胞株的核型分析實(shí)驗(yàn)操作研究:
  進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)的所需材料有:姬姆色素染料;秋水仙素;甲醇;冰乙酸;KCL;0.25%胰酶。
  實(shí)驗(yàn)儀器包括顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱、水浴鍋、烘箱等。
  具體實(shí)驗(yàn)步驟如下:
  將傳代的細(xì)胞密度調(diào)整為1*105/ml,接種于1個(gè)10cm培養(yǎng)皿,置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),約培養(yǎng)48小時(shí)后,加秋水仙素(終濃度為0.2ug/ml),搖勻后37℃孵育1-2h。
  將培養(yǎng)的細(xì)胞用胰酶消化收集到10ml離心管中,1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,去除上清液,留500ul,先將底部細(xì)胞吹勻,加入8ml 37℃預(yù)溫的0.075M KCL(37℃提前水浴),打勻后放37℃水浴箱40min,加入新鮮配制的固定液(甲醇/冰乙酸=2/1-3/1)2ml地混勻,室溫下放10min后,1000轉(zhuǎn)/分離心10min,去上清液,留500ul,先將底部細(xì)胞吹勻,新加入8ml固定液,離心清洗、重復(fù)三次后、滴片,放入60℃烘箱老化6小時(shí)(過(guò)夜);再將烤干的玻片放入胰酶(0.25%)中消化1min左右后,再放入吉姆薩染液中染色5-6min,取出用流水沖去染液后,在顯微鏡下觀察結(jié)果。
  相關(guān)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
  1.滴片的載玻片需預(yù)先泡酸處理;
  2.低滲溶液要用無(wú)菌水配制;
  3.低滲溶液,胰酶需要提前預(yù)熱;
  4.固定液、胰酶、吉姆薩染色液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

 

 

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